Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина
Белгородский государственный университет
Изложен оригинальный способ определения функциональной активности костного мозга (эритроцитарного баланса) у птиц в физиологических условиях, который может быть использован в качестве интегрального теста при оценке адаптационных резервов системы эритрона в условиях действия экстремальных факторов. Это позволяет использовать предлагаемый способ в гематологии и экологии животных. Способ технически прост, экономичен и отличается высокой воспроизводимостью.
Введение
В настоящее время разработаны надежные методы определения отдельных периодов и всего генерационного цикла клеток [1, 4, 6]. Особый интерес представляет количественная характеристика резерва эритроцитов, возможность его мобилизации при различных состояниях организма. Современная методика подсчета костномозговой продукции эритроцитов, разработанная Е.Н. Мосягиной [3, 4] и усовершенствованная А.В. Илюхиным и соавт. [1], основана на определении продолжительности жизни эритроцитов по содержанию ретикулоцитов до и после инкубации пробы крови за определенный промежуток времени, поскольку равновесие системы эритрона в норме обусловлено двумя факторами: естественной гибелью эритроцитов и их костномозговой продукцией [6].
Метод не получил широкого распространения ввиду недостаточной его проработанности, высокой вариабельности и не всегда физиологически обоснованных различий цифровых данных, отражающих концентрации ретикулоцитов, определяемых при разных способах их окраски. Кроме того, анализ литературных источников показал достаточно редкую применимость метода при исследовании активности эритропоэза у птиц и низших позвоночных и, как следствие, слабую изученность обозначенного вопроса у этих групп животных. Применение общепринятого способа оценки интенсивности эритропоэза у других систематических групп животных не представляется возможным ввиду физиологоморфологических и биохимических особенностей эритроидного ростка кроветворения, а именно – различной скорости созревания, высокого разновозрастного полиморфизма клеток в периферическом русле и сохранения ядер у зрелых форм.
В связи с этим задачей исследования явились усовершенствование способа выявления ретикулоцитов и их возрастной классификации для функциональной диагностики системы красной крови по данным подсчета инкубированных ретикулоцитов птиц в физиологических условиях.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования служила кровь, полученная из подкрыльцовой вены у здоровых половозрелых петухов кросса «Иза Браун». В качестве антикоагулянта использовали 3,8% цитрат натрия, 0,1 мл которого смешивали с 0,4 мл крови. Кровь с антикоагулянтом инкубировали в течение 4 ч [2] в биологическом термостате при 39°С. По истечении времени инкубации в пробирку отбирали 0,3 мл крови и добавляли 0,1 мл 1% раствора бриллиантового крезилового синего, приготовленного на физиологическом растворе (0,9% NaCl), продолжительность окрашивания при комнатной температуре составила 40 мин. Затем на чистых обезжиренных стеклах готовили мазки, которые фиксировали в метаноле, высушивали на воздухе и микроскопировали под иммерсией. Подсчет ретикулоцитов производили по степени их зрелости на 1000 эритроцитов, используя анализатор изображений «Видео-Тест-Мастер-Морфология» с программным обеспечением [5]. Диагностику функционального состояния системы красной крови производили по показателям эритроцитарного баланса, которые рассчитывали по формулам, предложенным А.В. Илюхиным и соавт. [1].
Результаты исследования
Используя предлагаемый способ, в крови птиц выявлены ретикулоциты в виде вытянутых эллипсоидов, окрашенных в бледно-зелёный цвет с ядром от светло-синего до фиолетового цвета, и синей сеточкой, имеющей различную конфигурацию в клетках разной степени зрелости: ретикулоциты 1 класса – сеточка заполняет всю цитоплазму и накладывается на ядро; ретикулоциты 2 класса – сеточка густо заполняет всю цитоплазму, при этом не накладывается на ядро; ретикулоциты 3 класса – сеточка расположена в основном вокруг ядра, иногда в виде эксцентрично лежащих клубков; ретикулоциты 4 класса – сеточка в виде нитевидных образований и отдельных включений, рассеянных по всей цитоплазме. Эритроциты – бледно-зелёного цвета с интенсивно синим ядром, без внутриклеточных включений (рис.).
Периферическая кровь петухов, увеличение х1600 1- ретикулоцит 1 класса, 2 – ретикулоцит 2 класса, 3 ретикулоцит – 3 класса.
Как видим, в условиях физиологической регенерации системы крови в связи с особенностью эритропоэза птиц, который при нормобластическом типе кроветворения предполагает поступление недозревших форм эритроцитов в периферическую кровь, где завершается процесс их формирования, присутствуют ретикулоциты третьего и четвёртого классов. Причём ритм регенераторных процессов системы эритрона (интенсивность эритропоэза) у отдельной особи будет зависеть от лабильности и адаптационных возможностей нервных структур, а также функционального резерва костного мозга птицы. Результаты показателей эритрокинетики представлены в табл.
Показатели эритроцитарного баланса крови птиц в физиологических условиях
№
птицы
^р,
млн/мкл
Классы
ретикулоцитов
, %
^0, %
Np4, %
Ту р, ч
Ту эр, сут
N, тыс/ (мкл-сут)
I – 0
3
5,2
II – 0
2,7
0,8
2,28
35,18
102433,2
III- 1,2
IV- 1,5
I – 0
7
4,96
II – 0
2,6
0,4
1,48
23,71
137080,1
III- 1,8
IV- 0,8
I – 0
9
5,55
II – 0,1
3,4
0,5
1,45
17,77
216440,6
III- 1,6
IV- 1,7
I – 0
10
3,7
II – 0
2
0,7
2,64
55
46620,0
III- 0,9
IV- 1,1
Примечание: N эр – количество эритроцитов в 1 мкл крови; Np0 – количество ретикулоцитов до инкубации; Np4 – количество ретикулоцитов после 4 ч инкубации; Т У p – период полувыведения ретикулоцитов из пробы, обусловленный их созреванием; Т У эр – период полувыведения эритроцитов из кровотока; N – продукция эритроцитов.
Заключение
Показатель функциональной активности эритроидного ростка кроветворения является одним из важных диагностических тестов, применяемый при оценке интенсивности процессов физиологической и репаративной регенерации в системе крови, может быть изучен у различных систематических групп животных с использованием менее атравматичного для клеток, точного метода, позволяющего получать достоверные результаты и экономить время исследования.
Список литературы
Илюхин А.В., Бурковская Т.Е., Шафиркин А.В., Ключанская Н.В. Некоторые методические вопросы исследования эритроцитарного баланса по данным подсчета инкубированных ретикулоцитов // Космическая биология и авиакосмическаямедицина.-1982.-Т.16, № 3. – С. 86-88.
Ляпунова Е.А., Скоркина М.Ю. Цитокинетические показатели эритроцитарного баланса у птиц в физиологических условиях // Физиология организмов в нормальном и экстремальном состояниях. Сборник статей. – Томск: Изд-во ТГУ, 2001. – С. 31-33.
Мосягина Е.Н. Эритроцитарное равновесие в норме и патологии – М.: Медгиз, 1962. – 271 с.
Мосягина Е.Н., Владимировская Е.Б., Торубарова Н.А., Мызина Н.В. Кинетика форменных элементов крови. – М.: Медицина, 1976. – 270 с.
Патент на изобретение № 2227280 РФ. Способ определения ретикулоцитов в инкубированной крови птиц / М.Ю. Скоркина, Е.А. Липунова. – по заявке № 2002119253 от 16.07.02 // БИПМ. – № 11, Ч. – 2004. – С. 557.
Илюхин А.В., Шашков В.С., Бурковская Т.Е., Зубеннова Э.С. Цитокинетика и морфология кроветворения при хроническомоблучении.-М.:Энергоиздат,1982. – 136 с.
Для подготовки данной работы были использованы материалы с сайта http://unid.bsu.edu.ru/
Дата добавления: 23.04.2014