Токсикометрия нефтезагрязнений с использованием микроорганизмов

Федеральноеагентство по образованию
Государственноеобразовательное учреждение
высшегопрофессионального образования
ИРКУТСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
КУРСОВАЯРАБОТА
ТОКСИКОМЕТРИЯНЕФТЕЗАГРЯЗНЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРООРГАНИЗМОВ
 
Иркутск 2009

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1 Нормативно-правовые основы экологического мониторинга окружающей среды в России
1.2 Физико-химические методыопределения нефтепродуктов и других токсинов в окружающей среде
1.3 Биотестирование
1.4 Использование микроорганизмов втоксикометрии
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

ВВЕДЕНИЕ
Нефть является одним изнаиболее распространённых источников топлива в мире (Петрикевич и др., 2003),но в то же время является наиболее опасным из загрязнителей окружающей среды.Большие объемы нефти попадают в экосистему в результате аварий притранспортировке, незаконных врезок в нефтепроводы, нарушений при добыче и т. д.Не являясь ксенобиотиком, нефть при извлечении из недр на поверхность земли,способна, тем не менее, проявлять сильные загрязняющие свойства. Попадая впочву, нефть оказывает токсическое воздействие на растения и животных, подавляетактивность почвенной микробиоты и нарушает баланс почвенных ферментов. В этойсвязи остро стоит проблема диагностики токсического влияния нефтяныхуглеводородов на многоуровневую экосистему почв (Киреева и др., 2007).
Природоохраннаядеятельность в стране и в мире должна быть направлена на уменьшение воздействийна природу вредных производств. Для этого необходимо создавать новыетехнологии, способные улавливать, перерабатывать, утилизировать загрязнителиили токсины, смягчая или предотвращая их воздействие на окружающую среду (file…). Площади земель и водоемов,загрязненных нефтью с каждым годом увеличиваются, поэтому продолжает оставатьсяактуальной проблема разработки новых и совершенствования существующихтехнологий ликвидации последствий техногенных контаминаций нефтью инефтепродуктами и восстановления биопотенциала нарушенных экосистем (Исмаилов,1988).
Немаловажной проблемойявляется определение нефтепродуктов в объектах окружающей среды. На практикешироко применяются физико-химические методы (ИК-, УФ-фотометрия, ЯМР,ИК-спектрометрия, газовая хроматография и т.д.). Биологические методыопределения токсинов в среде привлекают внимание исследователей благодаря ихвысокой чувствительности, информативности и экономичности. Использование вкачестве аналитических индикаторов микроорганизмов нередко является единственнонадежным методом определения малых количеств веществ, так как основано напрямом воздействии химических веществ на живую клетку.
Цель курсовой работы:познакомиться с литературой, касающейся вопросов использования микроорганизмовв биотестировании.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1 Нормативно-правовые основы экологического мониторинга окружающей среды в России
 
Национальный мониторинг России в настоящие время включает три вида мониторинга: санитарно-гигиенический, экологический, климатический (Саксонов и др.,2007).
Экологический мониторинг рассматривается как совокупность систем комплексного наблюдения за антропогенными и природными источниками воздействия, состоянием окружающей среды, динамикой происходящих в ней изменений, прогнозом развития ситуаций и управления ими. В качестве основных элементов мониторинг включает наблюдения за факторами воздействия и состоянием окружающей среды, прогноз ее будущего состояния и оценка фактического и прогнозируемого состояния природной среды. Ключевой задачей экологического мониторинга является обеспечение систематических наблюдений за экологическими эффектами взаимодействия природы, населения и хозяйства на определенной территории.
Мониторинг окружающей среды (экологического мониторинга), согласно Закону РФ «Об охране окружающей среды» (1992), состоит из государственной службы наблюдения за состоянием окружающей природной среды, государственного, производственного, общественного контроля.
В России действует Единая государственная система экологического мониторинга (ЕСЭМ) (Постановление…, 1993). ЕГСЭМ функционирует и развивается с целью информационного обеспечения управления в области охраны окружающей среды, рационального использования природных ресурсов, обеспечения экологически безопасного устойчивого развития страны и ее регионов, ведения государственного фонда данных о состоянии окружающей среды и экосистем, природных ресурсах, источниках антропогенного воздействия. Общее руководство ЕГСМ возложено на Государственный комитет РФ по охране окружающей среды (СЗ РФ, 1997).
Основными задачами ЕГСЭМ являются (Положение…, 1995):
— проведение наблюдений за изменением состояния окружающей среды и экосистемами, источниками антропогенных воздействий с определенным пространственным и временным разрешением;
— проведение оценок состояния окружающей среды, экосистем территории страны, источников антропогенного воздействия;
— прогноз состояния окружающей среды, экологической обстановки на территории России и ее и экономических сценариях развития страны и ее регионов. В соответствии с основными задачами в ЕГСЭМ осуществляется мониторинг состояния природных сред, экосистем, природных ресурсов и источников антропогенного воздействия, а также информационное обеспечение решения экологических проблем. Эти работы выполняются в рамках ЕГСЭМ на единых научно-методических и метрологических подходах.
В ЕГСЭМ образуются специализированные ведомственные подсистемы, связанные с мониторингом источников антропогенного воздействия предприятий различных отраслей промышленности и сельского хозяйства страны.
В ЕГСЭМ функционируют подсистемы обеспечения, к которым относятся: топографо-геодезическое и картографическое обеспечение, включая создание цифровых, электронных карт и геоинформационных систем; электронные системы передачи данных. В ЕГСЭМ могут быть образованы и другие подсистемы, решающие тематические целевые задачи.
ЕГСЭМ функционирует и развивается во взаимодействии с Российской системой по чрезвычайным ситуациям (РСЧС) и обеспечивает РСЧС всей необходимой информацией в согласованной форме и в согласованные сроки. В случае возникновения чрезвычайных ситуаций федерального и регионального масштабов ЕГСЭМ функционирует как подсистема РСЧС.
ЕГСЭМ функционирует на четырех основных уровнях: федеральном, региональном (бассейновом), субъектов Российской Федерации (территориальный уровень), локальном.
Целесообразность создания регионального уровня ЕГСЭМ определяется: необходимостью оценки состояния природных объектов, анализа природных процессов и экологически неблагоприятных явлений, когда их границы не совпадают с границами субъектов Российской Федерации; сложившейся структурой территориальных (региональных) органов ряда ведомств; целесообразностью создания мощных территориальных функциональных центров, способных обслуживать ряд субъектов Российской Федерации.
Данные для обеспечения информационных систем федерального (регионального) уровня передаются в соответствующие федеральные (региональные) центры указанных подсистем. Обобщение информации, получаемой территориальными центрами базовых и специальных подсистем, осуществляется по данной территории в региональных информационно- аналитических центрах (РИАЦ) территориальных органов Минприроды России по согласованию с территориальными (региональными) подразделениями федеральных органов исполнительной власти, обеспечивающих функционирование ЕГСЭМ.
Территориальные системы экологического мониторинга организуются в субъектах РФ и являются основными системообразующими элементами ЕГСЭМ (территориальными подсистемами ЕГ-СЭМ). Как и ЕГСЭМ, территориальные подсистемы формируются на основе базовых и специализированных подсистем при участии систем обеспечения соответствующего уровня.
Данные, получаемые всеми звеньями территориального уровня ЕГСЭМ, собираются в специализированных центрах базовых и специализированных подсистем данной территории, функционирующих на единой организационной, методической и информационной основе.
Сбор, хранение и анализ информации, поступающей от информационных звеньев базовых и специализированных подсистем мониторинга территориального уровня, а также федеральных центров специализированных подсистем, не имеющих территориального уровня, осуществляется в информационно-управляющих федеральных центрах соответствующих подсистем ЕГСЭМ, связанных между собой на единой организационной, методической и информационной основе.
Федеральный информационно-аналитический центр (ФИАЦ) Минприроды России осуществляет сводный анализ информации, передаваемой из информационно-управляющих центров соответствующих подсистем ЕГСЭМ федерального и территориального уровней в порядке, согласованном с федеральными органами исполнительной власти, обеспечивающих функционирование ЕГ-СЭМ, и органами исполнительной власти субъектов Российской Федерации. Обмен данными между информационными центрами подсистем ЕГСЭМ осуществляется на принципе бесплатного доступа к данным мониторинга, полученным за счет бюджетных средств. В Иркутской области с 1995 г. ведутся работы по программе разработки системы экологического мониторинга Иркутской области.
Организация и проведение работ по экологическому мониторингу в пределах Иркутской области осуществляется и координируется территориальной системой экологического мониторинга Иркутской области (ИРСЭМ) на принципах, правилах, нормах и положениях ЕГСЭМ (Постановление…, 1996).
Основными задачами ИРСЭМ являются (Постановление…,1996):
— своевременное и достоверное выявление зон возможного экологического неблагополучия и доведение этой информации до заинтересованных потребителей для выработки долгосрочных и экстренных мер по обеспечению экологической безопасности Иркутской области;
— организация и обеспечение информационных потоков в базу данных ИРСЭМ;
— обеспечение информационной поддержки приоритетных для Иркутской области конкретных задач управления экологической обстановкой, определяемых территориальными и федеральными программами, международными обязательствами Российской Федерации;
— обеспечение граждан и организаций информацией об экологической обстановке;
— развитие ИРСЭМ, включая совершенствование всех видов обеспечения ее функционирования;
— обеспечение эффективного информационного сопряжения ИРСЭМ с другими государственными информационными системами;
— реализация научно-технической политики ЕГСЭМ в области обеспечения информационной поддержки управления экологической обстановкой.
В рамках ИРСЭМ на основе базовых функциональных и специализированных систем государственных и ведомственных служб мониторинга осуществляется:
— мониторинг источников воздействия или мониторинг эмиссий субстанций;
— мониторинг воздействия на природную среду, связанный с контролем влияния источника (импактный мониторинг);
— мониторинг состояния природной среды, не связанный с определенным источником воздействия (мониторинг антропогенного фона).
Для оценки антропогенного воздействия объектов хозяйственной деятельности организуются отраслевые и производственные системы мониторинга источников воздействия на окружающую природную среду и зон их непосредственного влияния (импактный мониторинг), осуществляющие свое функционирование в рамках соответствующих базовых и специализированных подсистем ЕГСЭМ. Организация этих систем мониторинга осуществляется предприятиями и организациями, осуществляющими хозяйственную деятельность на территории субъектов Российской Федерации. Решение о необходимости наличия у предприятия указанных систем мониторинга принимается органами, выдающими лицензии на природопользование и проведение мониторинга состояния окружающей среды.
Для оценки состояния окружающей природной среды непосредственно в районах расположения (размещения) объектов, представляющих потенциальную опасность для населения, растительного и животного мира и состояния экосистем, формируются локальные сети наблюдения. Требования по их методическому и информационному сопряжению с ЕГСЭМ определяются совместным решением органов исполнительной власти субъектов РФ, специально уполномоченных федеральных органов исполнительной власти в области охраны окружающей природной среды, органов РСЧС, санитарно-эпидемиологического надзора. Ведение локального экологического мониторинга осуществляется природопользователем по разработанным им регламентам, согласованным со специальными уполномоченными государственными органами.
Системы мониторинга источника воздействий создаются за счет средств субъекта хозяйственной деятельности, который обеспечивает их регламентное функционирование. Системы мониторинга России тесно взаимосвязаны с международным мониторингом, который осуществляется в рамках Глобальной системы мониторинга окружающей среды (ГСМОС) и охватывает национальные и региональные (межнациональные) системы мониторинга (Саксонов и др.,2007).
 
1.2 Физико-химические методы определения нефтепродуктов и других токсинов в окружающей среде
Загрязнения окружающей среды нефтью инефтепродуктами (НП) одни из основных и наиболее часто встречающихся. Ихисточниками могут быть разливы топлива при транспортировке, хранении и т.п.,остатки несгоревшего топлива в выхлопных газах двигателей внутреннего сгорания(природные источники нефтяных загрязнений при выходе на поверхность нефтеносныхпород играют минимальную роль в общем загрязнении окружающей среды нефтянымиуглеводородами). Нефтепродукты являются нормируемым видом загрязнений. В РФустановлены предельно допустимые концентрации (ПДК) нефтепродуктов в воде (0.1мг/л для керосина, 0.1-0.3 мг/л для нефти), водоемов рыбохозяйственногоназначения 0.05 мг/л. (Основные свойства…, 1985; Санитарные…).
Основные методы определения НП вобъектах окружающей среды основаны на следующих принципах: 1) селективноевыделение суммы НП (или веществ, принимаемых за НП) из воды, почвы илипоглотительных растворов, фильтров, сорбентов и определение массыэкстрагируемых продуктов (гравиметрический метод); 2) определение какой-либохарактеристической группы компонентов или структурной характеристики молекул,входящих в состав нефти или нефтепродуктов, на основании чего судят об общейконцентрации нефтепродуктов (ИК- или УФ- фотометрия, люминесцентная, содержаниеопределенных металлов и др.); 3) по возможности полное определение всехвозможных компонентов НП с помощью ЯМР или ИК-спектрометрии, газовойхроматографии (ГX), сочетания ГХ и масс-спектрометрии (ГX-МС). Длядистанционного детектирования нефтяных разливов используют ИК- спектры внехарактеристической области в окнах прозрачности атмосферы (Бродский и др.,1998).
Для характеристики различных методовопределения нефти и нефтепродуктов в воде, почве и других объектах необходимо,прежде всего, определить понятие «нефтепродукты». Нефть, нефтяные фракции инефтепродукты состоят главным образам из углеводородов: н- и изоалканов,циклоалканов с 1-7 и более кольцами, среди которых можно выделить так называемыереликтовые углеводороды – изопренаны, стераны, тритерпаны; ароматических игидроароматических углеводородов, а также гетероатомных соединений – алифатических,алициклических и ароматических. Экстракты наряду с собственно НП обязательносодержат сопутствующие углеводороды, кислоты и др. Согласно определению,принятому Комиссией по унификации методов анализа природных и сточных вод стран- членов СЭВ (1968 г.), а также Международным симпозиумом в Гааге (1968 г.) за «нефтепродукты» при анализе вод следует принимать сумму неполярных и малополярных соединений,растворимых в гексане (Лурье, 1985). Поэтому НП из проб воды рекомендуетсяэкстрагировать неполярным растворителем, а экстрагируемые полярные примесиудалять хроматографией на силикагеле, флориселе или оксиде алюминия.Существующие нормы предельно допустимой концентрации НП в воде (0.3-0.05 мг/л)были введены в результате исследования растворов различных НП и сырой нефти вводе и по существу не могут применяться, скажем, к сумме углеводородов илидругих органических веществ (Бродский и др., 1998).
Методы, применяемые в массовоманализе. В практике экологического аналитического контроля для определения НП вводе наиболее широко применяются гравиметрический, ИК- спектрометрический ифлуориметрический методы (Лурье, 1985; Руководство…,1977; Дмитриев и др., 1989).В гравиметрическом методе органические соединения экстрагируют из водынеполярным растворителем (четыреххлористый углерод, пентан, гексан, петролейныйэфир, фреон-1,1,2-трихлор-1,2,2-трифторэтан); экстракт пропускают через колонкус сорбентом (активный оксид алюминия или силикагель), который сорбируетполярные вещества. Затем после выпаривания растворителя остаток взвешивают дляопределения суммы «нефтепродуктов». Обычно для анализа берут 0.1-3 л воды, подкисляют НСl до рН
Метод ИК-фотометрии основан на том,что растворенные или эмульгированные в воде НП экстрагируют четыреххлористымуглеродом, экстракт очищают от полярных соединений на колонке с оксидомалюминия и фотометрируют в специфической области 2700-3100 см-1 (Лурье,1985; Орадовский, 1977; Дмитриев и др., 1989). Градуируют анализатор с помощьюспециальной градуировочной смеси, включающей гексадекан (37.5%), изооктан(37.5%) и бензол (25%), набор групп -СН, -СН2, -СН3,который считается близким к такому набору в реальных НП. Этот стандартныйобразец пригоден только для градуировки ИК-спектрафотометров и не годится дляконтроля правильности, так как не отражает реального состава НП и его измененияв процессе выветривания, а эффективность экстракции его компонентовнедостаточно хорошо моделирует эффективность экстракции реальных компонентовнефти (в частности, нафтенов и алкилбензолов). Он совершенно непригоден придругих методах определения НП, например ГХ. Чувствительность метода ИК-фотометриидля пробы воды 2 л равна 0.05 мг/л (Орадовский, 1977).
Люминесцентный метод основан наизмерении флуоресценции полициклических ароматических углеводородов, входящих всостав нефти, возбуждаемой УФ-излучением ртутной или ксеноновой лампы. Методы, основанныена поглощении УФ и люминесцентного излучения, характеризуют толькоароматические, в основном полициклические структуры, при этом коэффициентыпоглощения разных ароматических структур могут очень сильно различаться, такчто результаты зависят не только от количества, но и от состава ароматическихсоединений. Градуируют по хризену или какой-либо определенной нефти (например,легкой аравийской нефти). Насыщенные структуры, составляющие большую часть НП,при этом игнорируются. Благодаря высокой чувствительности эти методы, особенно,люминесцентный, хорошо подходят для скринингового анализа, но могут приводить кошибочным результатам при количественном определении НП.
Флуориметрический метод определенияНП в воде (Gladilovich et al., 1997) с экстракцией пробы н-гексаном и последующимизмерением флуоресценции (возбуждение — 250-290 нм, излучение — 300-350 нм)обеспечивает предел обнаружения около 0.005 мг/л. Для 250 проб воды,проанализированных флуориметрическим и ИК- фотометрическим методами, в 90% случаевразность результатов, полученных обоими методами, была меньше погрешностиопределения.
ИК- фотометрический метод сильнозавышал результаты для проб, содержащих жиры, продукты переработки древесины ибольшое количество природных органических веществ. Флуориметрический же методзанижал результаты тех проб, в которых основными компонентами были легкиеуглеводороды (бензин, керосин).
Флуориметрический метод былиспользован для оценки нефтяного загрязнения данных осадков в Аравийском заливепосле разрушения Ираком нефтяных терминалов в Кувейте (Massoud et al.,, 1996). 20 г пробы экстрагировали в аппарате Сокслетасмесью дихлорметана и гексана экстракт концентрировали до 1 мл и определялинефтяные углеводороды на спектрофлуориметре Shimadzu Fl (FOU-3). Длявозбуждения использовали линию 310 нм, излучение регистрировали при 360 нм.Результаты выражали в хризеновых эквивалентах. Отмечено, что содержание восадках органического углерода не может быть использовано в качестве индикаторанефтяного загрязнения в Аравийском заливе.
Большинство методов, которые можноиспользовать в полевых условиях, основано на измерении паров органическихвеществ. Они, как правило, хороши для качественного детектирования летучихорганических веществ, но дают существенные погрешности из-за малойправильности. Основной источник погрешности – то, что измеряют углеводороды впаровой фазе, а не непосредственно в почве. Поэтому результаты сильно зависятот температуры, летучести определяемых веществ, природы загрязнений (бензин,дизельное топливо, соляровое масло и др.) (Бродский и др., 1998).
Для определения общего содержанияуглеводородов в воде и почве предложены и другие методы, которые можноиспользовать в полевых условиях. В комплект для полевых измерений фирмы «Hach» входят два набора реагентов иаппаратуры для иммуноферментного детектирования, а также полуколичественногоопределения общего содержания углеводородов в воде и почве с помощью карманногоколориметра. Использован вариант так называемого энзимо-связанногоиммуноадсорбционного анализа (ELlSA). Интенсивность окраски, вызваннойобразованием ферментных конъюгатов, обратно пропорциональна содержаниюуглеводородов в пробе. В качестве антигена выступает один или несколько типовнефтяных углеводородов- загрязнителей. Метод основан на конкурентном связыванииантигена и конъюгата энзима с иммобилизованным антителом. Предел обнаружения дляводы и почвы составляет 10 × 10-6 и 100 × 10-6,соответственно. Наборы антител рассчитаны на детектирование ароматических углеводородов,таких как бензол, толуол, м-ксилол, этил бензол, стирол и гексахлорбензол.Основное применение – для определения течи подземных хранилищ топлива (Бродскийи др., 1998).
Пары нефтяных углеводородов частосоставляют основную часть летучих органических соединений в воздухе (Исидоров,1992; Бродский и др., 1997). Их определение основано либо на непосредственноманализе проб воздуха, либо на улавливании и концентрировании определяемыхвеществ с последующим их анализом, обычно с помощью ГХ или ГХ-МС.Непосредственно определить сумму органических соединений, представляющих собойв городской атмосфере главным образом испарившиеся или несгоревшие остаткимоторных топлив, можно прокачиванием воздуха через фотоионизационный (Бродскийи др., 1997) или пламенно-ионизационный (Руководство…, 1991)хроматографический детектор (без разделения на колонке). Предел обнаружениятакой системы с фотоионизационным детектором составляет 0.1 млн-1,интервал линейности 0.1-2000 млн-1, время отклика — около 3 с.
Как правило, все рутинные методы,используемые для определения НП в окружающей среде, позволяют измерять одинколичественный параметр, который и является мерой содержания НП в пробе. Вопросо природе определяемых веществ, сигнал которых использован для оценки этогопараметра, остается вне конкретного определения, он решается в рамкахразработки методики. Поэтому часто бывает трудно оценить правильностьрезультатов; обычно это требует анализа большой совокупности измерений илисравнения с результатами других методов (Смирнов,1985)
Применение ГХ и ГХ-МС для определенияНП в объектах окружающей среды. Метод ГХ (и тем более ГХ-МС) помимоколичественной оценки содержания или концентрации НП позволяет одновременнохарактеризовать качественные параметры — принадлежность определяемого веществак нефтепродуктам и даже его качественный состав (Хмельницкий и др., 1990;Шляхов, 1984; Хромченко и др., 1981; Бродский и др., 1994; Руденко и др., 1981;Немировская и др., 1997; Бродский, 1985).
Еще в 1968 г. было показано, что ГХ скороткой насадочной колонкой и ПИД является хорошим методом скринингауглеводородных загрязнений в морской воде и в почве (Ramsdale S.J et al.,1968). Этот метод относительно быстр, так как не требуетникакой пробоподготовки; для анализа достаточно нескольких миллиграммоввещества; пробы загрязнений (вода, песок и т.п.) вводят в небольших открытыхампулах. С помощью этого метода можно давать общую классификацию нефтяныхзагрязнений: сырая нефть, топливо, остатки от промывки танков, остатки на днетанков.
Обычно с помощью ГХ или ГХ-МСопределяют следующие характеристики нефтепродуктов (или вообще экстрагируемыхорганических веществ): распределение н-алканов, наличие и содержаниеопределенных изоалканов, в частности пристана и фитана; наличие и распределениестеранов и тритерпанов, неразрешенную сложную смесь углеводородов (UCM — unresolyed соmр1ех mixture), ароматические углеводороды(Oil in the Sea…,1985).
Другие методы определения НП вокружающей среде. ВЭЖХ применяли для группового фракционирования нефтяныхфракций и аналогичных проб. Основным ограничением этого метода была трудностьколичественного анализа выделенных фракций. ВЭЖХ с трехмерным флуоресцентнымдетектированием было предложено использовать для анализа тяжелой фракциивыветрившихся нефтей (Butt et al., 1986).
Показана возможность оценки уровнянефтяного загрязнения по результатам определения металлов в донных осадках (Massoud et al., 1996) или по высокотемпературной кислородной окисляемости(Зуев и др., 1995).
1.3 Биотестирование
Под биотестированием(bioassay) обычно понимают процедуру установления токсичности среды с помощьютест-объектов, сигнализирующих об опасности независимо от того, какие веществаи в каком сочетании вызывают изменения жизненно важных функций у тест-объектов.Благодаря простоте, оперативности и доступности биотестирование получилоширокое признание во всем мире и его все чаще используют наряду с методамианалитической химии.
Биотестирование как методоценки токсичности водной среды используется:
—   при проведениитоксикологической оценки промышленных, сточных бытовых, сельскохозяйственных,дренажных, загрязненных природных и прочих вод с целью выявления потенциальныхисточников загрязнения,
—   в контролеаварийных сбросов высокотоксичных сточных вод,
—   при проведенииоценки степени токсичности сточных вод на разных стадиях формирования припроектировании локальных очистных сооружений,
—   в контролетоксичности сточных вод, подаваемых на очистные сооружения биологического типас целью предупреждения проникновения опасных веществ для биоценозов активногоила,
—   при определенииуровня безопасного разбавления сточных вод для гидробионтов с целью учетарезультатов биотестирования при корректировке и установлении предельнодопустимых сбросов (ПДС) веществ, поступающих в водоемы со сточными водами,
—   при проведенииэкологической экспертизы новых материалов, технологий очистки, проектовочистных сооружений и пр.
Тест-объект (testorganism) – организм, используемый при оценке токсичности химических веществ,природных и сточных вод, почв, донных отложений, кормов и т.д.
Тест-объекты, поопределению Л.П. Брагинского – «датчики» сигнальной информации о токсичностисреды и заменители сложных химических анализов, позволяющие оперативноконстатировать факт токсичности (ядовитости, вредности) водной среды («да» или«нет»), независимо от того, обусловлена ли она наличием одного точноопределяемого аналитически вещества или целого комплекса аналитически неопределяемых веществ, какой обычно представляют собой сточные воды.Тест-объекты с известной степенью приближения дают количественную оценку уровня токсичности загрязнения воднойсреды — сточных, сбросных, циркуляционных и природных вод. Для биотестированияиспользуются различные гидробионты — водоросли, микроорганизмы, беспозвоночные,рыбы. Наиболее популярные объекты — ювенальные формы (juvenile forms)планктонных ракообразных-фильтраторов Daphniamagna, Ceriodaphnia affinis. Семидневный тест насуточной молоди цериодафнии Ceriodaphniaaffinis позволяет за более короткий срок (7 суток), чем на Daphnia magna (21 сутки) дать заключениео хронической токсичности воды.
Важное условие правильногопроведения биотестирования – использование генетически однородных лабораторныхкультур, так как они проходят поверки чувствительности, содержатся в специальных,оговоренных стандартами лабораторных условиях, обеспечивающих необходимуюсходимость и воспроизводимость результатов исследований, а также максимальнуючувствительность к токсическим веществам.
Новое поколениебиотестов, разработанных в лаборатории экологической токсикологии и воднойэкологии (LETAE),(Университет Гент, Бельгия под руководством проф. G. Persoone(http://www.microbiotests.be/) Токскиты предназначены для проведенияисследований острой токсичности природных сред и содержат все обходимыематериалы для выполнения биотестирования или экотоксикологических исследований(тест-организмы в анабиотическом состоянии, эфиппиумы дафний (resting eggs),покоящиеся яйца коловраток, яйца артемии, культуры водорослей). Toxkit®реализуются вместе со всеми необходимыми приспособлениями, посудой и средамикультивирования.
Жизненная функция иликритерий токсичности (toxicity criterion), используются в биотестировании дляхарактеристики отклика тест-объекта на повреждающее действие среды.
Тест-фукнкции,используемые в качестве показателей биотестирования для различных объектов:
·       для инфузорий,ракообразных, эмбриональных стадий моллюсков, рыб, насекомых – выживаемость(смертность) тест-организмов.
·       для ракообразных,рыб, моллюсков – плодовитость, появление аномальных отклонений в раннемэмбриональном развитии организма, степень синхронности дробления яйцеклеток.
·       для культуродноклеточных водорослей и инфузорий – гибель клеток, изменение (прирост илиубыль) численности клеток в культуре, коэффициент деления клеток, средняя скоростьроста, суточный прирост культуры.
·       для растений – энергияпрорастания семян, длина первичного корня и др.
Длительность биотестирования зависит от задачи,поставленной исследователем.
Острые биотесты (acute tests), выполняемые наразличных тест-объектах по показателям выживаемости, длятся от нескольких минутдо 24-96 часов.
Краткосрочные (short-term chronic tests) хроническиетесты длятся в течение 7 суток и заканчиваются, как правило, после полученияпервого поколения тест-объектов.
Хронические тесты (chronic tests) на общуюплодовитость ракообразных, охватывающие 3 поколения, длятся до рождения молодив F3. Токсический эффект (toxic effect) – изменение любого показателяжизнедеятельности или функций организма под воздействием токсина. Зависит отособенностей яда, специфики метаболизма организма, факторов внешней среды(содержание кислорода, рН, температуры и др.).
Токсичность (toxicity) – свойство химических веществпроявлять повреждающее или летальное действие на живые организмы. Вещество,оказывающее токсическое действие, называется токсином, а процесс воздействия токсинана организм – токсикацией (на экосистему – токсификацией). По Н.С. Строганову,количественно токсичность вещества для отдельного организма определяется каквеличина, обратная медианной летальной концентрации: Т = 1/LC50.Токсичность водной среды (toxicity of water environment) – токсичность воды идонных отложений для гидробионтов, возникающая вследствие появления в нейтоксических веществ природного или антропогенного происхождения(ксенобиотиков), загрязнения сточными водами, токсическими атмосфернымиосадками и пр. При возникновении токсичности водной среды вода из среды,поддерживающей жизнь, становится средой, губительной для жизни. Степеньтоксичности водной среды оценивается методами биотестирования, а также попревышению ПДК (предельно допустимых концентраций).
Острая токсичность выражается в гибели отравленногоорганизма за короткие промежуток времени — от нескольких секунд до 48 ч.Хроническая токсичность среды проявляется через некоторое время в виденарушений жизненных функций организмов и возникновения патологических состояний(токсикозов). У водных организмов хроническая токсичность выражается вгонадотропном и эмбриотропном действии токсина, что приводит к нарушениюплодовитости (продуктивности), эмбриогенеза и постэмбрионального развития,возникновению уродств (мутаций) в потомстве, сокращению продолжительностижизни, появлению «карликовых» форм.
Интегральная токсичность (integral toxicity), поопределению Л.П. Брагинского, токсичность сложных смесей, сточных вод,многокомпонентных факторов для водных организмов.
Количественно интегральная токсичность определяетсякак величина, обратная максимальному разведению (1:2, 1:5, 1:10, 1:50, 1:100 ит.д.), при котором не наблюдается каких-либо нарушений жизненно важных функцийтест-организмов при 24-48 часовом биотестировании. Выражается в баллахтоксичности (БТи) целыми числами (2, 5, 10, 50, 100 и т.д.) соответственновеличинам разведения. Баллы токсичности могут быть четко ранжированы ипозволяют выстраивать ряд исследуемых веществ или вод по снижению (повышению)уровня их токсичности.
Толерантность (tolerance) – выносливость(устойчивость) организма к повреждающим воздействиям. Диапазон толерантности –пределы колебаний концентраций токсических веществ, при которых не происходитнарушений функций организма.
Толерантный лимит (tolerance limit, TLm) –количественное выражение концентрации токсина, при которой гибнет или выживает50% тест-организмов за 48 ч опыта.
Токсикорезистентность (toxin resistance) –сопротивляемость живых организмов к воздействию токсических веществ.
Токсикометрия (toxicometry) совокупность приемов оценкитоксичности веществ. Основными приемами токсикометрии являются установлениеминимально переносимой или пороговой (threshold concentration) концентрации (LC0),медианной летальной концентрации (LС50), или дозы (LD50),и зоны токсического действия (toxic effect limits) — диапазона токсическихконцентраций — от LC0до абсолютно летальной (LC100).
Биомаркеры– это организмы и их характеристики, которые позволяют диагностировать текущеесостояние окружающей среды. В качестве характеристик могут выступатьфизиологические, биохимические, иммунологические и другие свойства (процессы)организмов.
Биоиндикация(bioindication) – методопределения качества среды обитания организмов по видовому составу ипоказателям количественного развития видов биоиндикаторов и структуреобразуемых ими сообществ.
Биоиндикатор(bioindicator)– организм, вид, популяция, сообщество, характеризующиеся специфическимиособенностями обитания или указывающие на специфические изменения условий среды.Биоиндикаторы делят на следующие группы:
1.        Индивидуальные:размер особей, плодовитость, наличие аномальных особей и т.д.
2.        Процессы: увеличениеили уменьшение скоростей процесса (например, скорости фотосинтеза).
3.        Структурные:видовая структура, число толерантных (интолерантных видов), биотические индексыи т.д.
4.        Экосистемные: видовоеразнообразие, видовая структура.
Биоиндикаторы загрязнения (bioindicatorsof contamonation) — 1) организмы, которые поглощают(накапливают) токсические вещества и способны в силу этого быть показателямизагрязненности воды данным веществом; 2) организмы, свидетельствующие озагрязненности воды. По набору таких организмов в водоеме судят о качестве воды(Кузьменко и др., 1999).
В отличие от биомаркеров, биоиндикаторы не могутмгновенно реагировать на изменение экологических условий, т.к. их индикаторнымисвойствами являются популяционные процессы и процессы в сообществе в целом.Основным преимуществом биоиндикаторов перед биомаркерами является тот факт, чтодалеко не всегда кратковременное изменение условий, на которое реагируетбиомаркеры, приводит к негативным изменениям в популяциях, сообществах иэкосистемах.
Количественные меры токсичности веществ для живыхорганизмов- это показатели острой токсичности NOEC, LC0, LC50, LC100,устанавливаемые для «чистого» вещества при его лабораторном исследовании.Показатели не имеет универсального значения и устанавливается для каждоготест-объекта индивидуально. NOEC — no observed effect concentration –максимально недействующая концентрация вещества; LC0 — минимальныйпорог чувствительности, при котором отмечаются специфические тест-реакции илисмертность тест-объектов; LC50 — стандартная мера токсичностивещества, показывающая, какая концентрация вещества вызывает гибель 50%тест-организмов за установленное время (24, 48 или 96 ч);LC100 –высший смертельный порог для всех животных или тест-культуры водорослей,использованных в опыте.
Биотестирование, как правило, используют дохимического анализа, т.к. этот метод позволяет провести экспресс-оценкуприродной среды и выявить «горячие точки», указывающие на наиболее загрязненныеучастки акватории (территории, полигона). На участках, где методамибиотестирования выявлены какие-либо отклонения, и исследуемая средахарактеризуется как токсичная, аналитическим путем необходимо установитьпричины этого явления.
Существует два методических подхода для определениятоксичности почв. Для экспресс-диагностики используют водные экстракты,содержащих водорастворимые фракции почв. В этом случае биотестированиевыполняют на традиционных для водной токсикологии тест-объектах – ракообразных,инфузориях, водорослях. При необходимости исследовать фитотоксические свойствапочв в качестве тест-объектов используют семена культурных растений – овса, кресс-салатаи др. В этом случае показателями токсичности служат энергия прорастания семян,морфометрические характеристики листа и др.
Загрязнение окружающей среды нефтепродуктами можетбыть охарактеризовано по их содержанию в тканях живых организмов. Так, в тканяхрыб и моллюсков из Северной Балтики (Финский архипелаг) определялиалифатические и ароматические углеводороды (Paasivirtaet al.,1981).
Хромато-масс-спектрометрическийанализ тканей мидий, выловленных в районе Севастопольской бухты, показалналичие насыщенных и ароматических углеводородов, состав которых соответствовалдеградировавшим нефтепродуктам в интервале температур кипения дизельноготоплива (Савчук, 1995).
1.4 Использованиемикроорганизмов в токсикометрии
Использование в качестве аналитическихиндикаторов микроорганизмов нередко является единственно надежным методомопределения малых количеств веществ, так как основано на прямом воздействиихимического вещества на живую клетку. Ответная реакция микробной культуры наизменение состава среды представляет собой среднее из показателей миллионовотдельных организмов, что обеспечивает наиболее объективные и достоверные результаты.
Однако микробиологические методынедостаточно разработаны как методически, так и в плане инструментальногообеспечения. Растущие масштабы их применения для решения разнообразныханалитических задач в медицине, экологии, в фармацевтической, пищевой ипарфюмерной промышленности, а также в системе лабораторий, контролирующихкачество природных и сточных вод (Nicolas, 1966; Koch et al., 1964; Kavanagh, 1963; Brown et al., 1976) требуют современного аппаратурного оснащения иавтоматизации. В связи с этим интересно рассмотреть индикаторные свойствамикроорганизмов с точки зрения способов трансформации их в аналитическийсигнал, регистрируемы и с привлечением технических средств.
Под действием химических веществразличных концентраций могут изменяться морфологические, культуральные и физиолого-биохимическиесвойства микроорганизмов. Например, в присутствии сублетальных концентрацийкатионов тяжелых металлов изменяются почти все перечисленные свойства микробныхклеток, их форма, размеры, ослабляются ростовые процессы, понижаетсяферментативная активность, интенсивность дыхания (Сенцова и др.,1985). Поддействием Ni2+ на морскую бактерию Artrobacter тariпиs значительно увеличиваются размеры клеток: приконцентрации Ni2+4*10-4 моль объем их за 4.5 ч возрастаетв 250 раз (Gobet et al., 1970). В процессе роста бактерий и дрожжей на среде,содержащей медь, размеры клеток уменьшаются (Авакян, 1973). В присутствиикомплексных ионов платины клетки Е. coli приобретаютнитевидную форму (Rosenberg et al.,1967).
Многие токсические вещества вызываютпоявление у бактерий слизистой капсулы, предохраняющей клетку от гибели. Поддействием фенола, этилового спирта утрачивается подвижность клеток бактерийрода Proteus (Нестерова, 1972). Регистрируют морфологическиеизменения путем микроскопирования препаратов живых или фиксированных клеток спомощью электронного микроскопа. Предложено также дополнительное устройство,содержащее ряд камер и позволяющее наблюдать за развитием микроорганизмов впроточных питательных средах высокоапертурными объективами микроскопов (Гашинский,1973).
Способы регистрации информации,получаемой с помощью микробиологических методов многообразны. Они включаютвизуальные, приборные и математические методы. На визуальной оценке результатовоснованы полуколичественные методы определения антибиотиков (Сиволодский, 1974),латекса трибутилоловосодержащего сополимера АБП-10П, метода оценки токсичностисточных вод. Полуколичественный метод определения оловоорганического соединенияАБП-10П разработан учеными (Туманов и др., 1998) на основе регистрации ростовыхреакций трех различных по чувствительности штаммов бактерий B. laterosporus, B. pumilis 732 и Sarcina lutea (Туманов и др., 1988). Он позволяет определять нерастворимыев воде соединения (без предварительного их разложения) в диапазоне концентраций2-40 мкг/мл. Метод оценки токсичности сточных вод (Павленко и др., 1988) сиспользованием условно прототрофного штамма Saccharomyces cerevisiae дает возможность количественнохарактеризовать токсико-генетическое действие промышленных сточных вод путемрегистрации цитостатического и летального эффектов.
При качественном обнаружении иколичественном определении биологически активных веществ часто принимают вовнимание зависимость культуральных свойств микроорганизмов от химическогосостава среды. К ним относятся различные ростовые реакции: стимуляция илиингибирование роста в зависимости от концентрации определяемого вещества исвязанные с ними изменения численности клеток, продолжительности отдельных фазроста, динамики накопления биомассы, размеров бактериальных колоний, характераих поверхности и пигментации (Рубенчик, 1972; Глухова, 1980).
Наиболее простым и широкораспространённым способом регистрации ростовых реакций микробных культурявляется измерение диаметра и площади зон угнетения или стимуляции ростабактерий при выращивании их на плотных средах. Этот принцип положен в основуметодов определения многих антибиотиков и витаминов (Егоров, 1965). Онреализован при разработке метода определения трилана (4,5,6-трихлорбензоксизалинона-2),используемого для защиты бумаги и изделий из нее от биоповреждений (Туманов идр., 1982). В качестве аналитического сигнала использована ростовая реакциябактерий Bacillus mesentericus 5 Trevisan, характеризующихся повышеннойчувствительностью к трилану и устойчивостью в щелочной среде. Диаметр зоныугнетения роста тест-культуры в растворе 0,1 М КОН пропорционален логарифму концентрации указанного соединения. Предложенный способ позволяет определить триланв диапазоне концентраций от 5 до 100 мкг в 0,1 мл раствора, а также в бумаге.
Для определенияэтилмеркурхлорида в качестве аналитических индикаторов использовали культурыгриба Aspergillus niger и дрожжей Torula candida,регистрировали их ростовую реакцию измерением площади зон подавления роста.Предел обнаружения – 0,1 мкг/мл, относительная погрешность метода – 10% (Туманови др.,1982).
Изменения численностимикробных клеток под действием биологически активных веществ часто фиксируют спомощью турбидиметрических методов, измеряя оптическую плотность жидкойкультурной среды, в которой выращивают микроорганизмы, с помощьюфотоэлектроколориметра или нефелометра.
Метод определениязагрязнённости вод, описанный в (Потапова и др., 1988), основан наингибировании роста культур водных бактерий и позволяет оценивать качествосточных вод, содержащих сернокислую медь в концентрации 1×10-3мг/л и более, смесь пестицидов пропанида и сатурна в концентрациях 5×10-5и 1×10-3 мг/л, смесь фенола и формальдегида в концентрациях5×10-2 и 1×10-2 мг/л, соответственно.
Одним из культурныхсвойств бактерий является способность к образованию пигментов, котораяутрачивается при отсутствии в среде некоторых элементов. На этом основанвизуальный способ качественного обнаружения катионов железа, меди, магния инекоторых других элементов (Месробяну и др., 1963).
Отклик микроорганизмов наизменение химического состава среды выражается не только в интенсивностипроцессов воспроизводства (размножения) или ростовых реакциях, но и вразнообразных физиолого-биохимических реакциях.
В качестве аналитическогосигнала могут быть использованы термограммы микроорганизмов. В работе (Monk, 1978) приведены доказательствазависимости количества тепла, выделенного микробными клетками, от химическогосостава среды.
Объективным показателемсодержания в среде токсичных примесей могут служить активность данногомикроорганизма, которая изменяется в зависимости от концентрации отдельныхвеществ.
В последние годы дляаналитических целей стали использовать люминесцентные свойства светящихсябактерий, принадлежащих к роду Photobacterium и Beneckea. Биолюминесцентный анализ основан на специфических реакциях с высокимквантовым выходом, позволяющих применять их для определения многих биологическихактивных веществ.
Показана возможностьиспользования светящихся бактерий для определения фенольных компонентов сточныхвод (Данилов и др.,1988). В качестве токсинов использовали типичныепредставители фенолов сточных вод: монофенолы, резорцин, гидрохинон и продуктыего окисления н-бензохинон.
Биологический методанализа может основываться не только на подавлении жизнедеятельности живыхорганизмов. Перспективным приёмам повышения чувствительности этого методаявляется использование биологического концентрирования. Процесс биологическогоконцентрирования использовали для выделения малых концентрацийжизненно-необходимых катионов из разбавленных растворов (Постнов и др., 2000).В качестве аналитического индикатора применён плесневый гриб Aspergillus niger, выращенный на питательном растворе, содержащемопределённые количества катионов железа, меди или цинка. Показателем содержаниякатионов в растворе служила биомасса гриба и данные последующего спектральногоопределения их в биомассе после высушивания и минерализации. Установлены уровниконцентраций катионов, подавляющих рост культуры гриба; они в десятки разпревышают концентрации, стимулирующие её рост. Таким образом, включение ваналитический арсенал методик, основанных на стимуляции роста индикаторныхорганизмов, расширяет границы традиционного биотестирования, значительноповышает чувствительность биологического метода анализа.
Обобщая приведенные данные, касающиесяособенностей микробиологических методов определения токсических веществ,следует отметить многообразие ответных реакций микробных культур на воздействиехимических элементов и соединений и разнообразие способов их трансформации ваналитический сигнал. Выбор наиболее эффективных из них зависит от механизма иглубины воздействия вещества на индикаторный организм, что, в свою очередь,определяет чувствительность и избирательность биометода (Туманов, 1998).
В зависимости от целей анализавозможны как визуальные, так и инструментальные способы оценки и регистрацииинформации, получаемой с помощью микробиологических методов. При контролехимических загрязнений водной среды и анализе их состава предполагается использованиеспециальной аппаратуры типа ферментеров-хемостатов, турбидостатов. В нихавтоматически поддерживается режим культивирования по основным параметрам среды(растворенный кислород, температура, рН среды, плотность микробной культуры) (Mitruka et al., 1975; Крайнюкова, 1988). Чувствительные и надежныетоксикогpафы для регистрации аналитического сигнала позволяют избежатьсубъективных ошибок и повысить воспроизводимость результатов.
Перспективны в развитиимикробиологических методов биоаналитические устройства – биосенсоры, содержащиеиммобилизованные клетки микроорганизмов и обеспечивающие контакт определяемымвеществом. Их составной часть являются преобразователи биохимической илиростовой реакции микробного индикатора в аналитический сигнал. В этом случаебиологический объект выступает в роли первичного источника информации, котораязатем воспринимается находящимся в непосредственной близости вторичным – физическимдатчиком.
Современные способы быстрого контролятоксических загрязнений природных и сточных вод предусматривают введениебиометрической или другой биоэлектрической информации в ЭВМ, пригодной вкачестве элемента мониторинга биосферы (Туманов, 1998).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Использование в качествеаналитических индикаторов микроорганизмов различных систематических ифизиологических групп дает возможность создания методов с различнойизбирательностью определения.
Из приведенного обзора литературывидно, насколько многообразны ответные реакции микробных культур на воздействиехимических элементов и соединений, а также насколько разнообразны способы ихтрансформации в аналитический сигнал. Выбор наиболее эффективных из них зависитот механизма и глубины воздействия вещества на индикаторный организм, что, всвою очередь, определяет чувствительность и избирательность биометода (Туманов,1998).
Высокая специфичность методов можетбыть достигнута применением ауксотрофных штаммов, то есть штаммов, зависимых отналичия в среде тех или иных веществ.
В целях повышения избирательнocти ичувствительности определения биологически активных веществ обоснован новыйхимико-биологический подход, основанный на предварительном, изменениибиологической активнocти определяемого вещества в процессе пробоподготовки.Рассматриваются другие приемы решения поставленных задач путем повышениятемпературы анализируемого раствора, использования экстракции, биоаккумуляции инестандартных методик анализа (Постнов, 1999).

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1.     АвакянЗ.А. Микробиология. Итоги науки и техники / З.А. Авакян — М., 1973.-Т.2. -С.5-45 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
2.     Биоиндикация ибиотестирование ксенобиотиков. Комплексное биотестирование нефтезагрязненныхпочв / Н.А. Киреева, Т.Р. Кабиров, И.Е. Дубовик // Теоретическая и прикладнаяэкология. -2007. — №1
3.     Бродский Е.С.Методы исследования состава органических соединений нефти и битумоидов / Е.С.Бродский — М.: Наука, 1985. — С. 57-126 (цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
4.     Бродский Е.С.Экологическая химия / Бродский Е.С., Клюев Н.А. -1994 -Т.3-№1 -С.49-57(цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
5.     Бродский Е.С.Экологическая химия.// Е.С. Бродский, О.Н. Филина, И.М. Лукашенко и др. -1997 -Т.6- №1 — С.24-28 (цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
6.     Бродский Е.С.Определение нефтепродуктов в объектах окружающей среды / Е.С. Бродский, С.А.Савчук // Журнал аналитической химии. — 1998. — Т.53, №12. — С. 1238-1251.
7.     ГашинскийВ.В.Микробиология / В.В. Гашинский -1973.-Т.42.-№4.-С.737-740 (цитировано поТуманов, Глухова и др., 1998).
8.         ГлуховаМ.Н. Анализ окружающей природной среды / М.Н. Глухова, А.А. Туманов — Сб. ГГУ.Горький, 1980. -С.14-20(цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
9.         ДаниловВ.С. Антибиотики / В.С. Данилов, Н.С. Егоров -1988. №4. — С. 304 (цитировано поТуманов, Глухова и др., 1998).
10.      Дмитриев М.Т.Санитарно-химический анализ загрязняющих веществ в окружающей среде / М.Т.Дмитриев, Н.И. Козина, Н.А. Пинигина — М.: Химия, 1989.- С. 287 (цитировано поБродский, Савчук, 1998).
11.   ЕгоровН.С. Микробы- антагонисты и биологические методы определения антибиотическойактивности / Н.С. Егоров — М.: Высшая школа, 1965. — 211с. (цитировано поТуманов, Глухова и др., 1998).
12.    Зуев Б.К. / Б.К. Зуев, О.К. Тимонина,В.Д. Подругина // Журн. Аналитической химии. — 1995. — Т.50. — №6 — С.663-668(цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
13.    Исидоров В.А. Органическая химияатмосферы / В.А. Исидоров -Л.: Химия,1992 (цитировано по Бродский, Савчук,1998).
14.                  Исмаилов Н.М.Микробиологическая и ферментативная активность нефтезагрязненных почв / Н.М.Исмаилов //Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М., 1988.
15.   КрайнюковаА.Н. // Методы биотестирования вод: Сб. Ин-та хим. физ. АН СССРЧерноголовка,1988. — С.4-13 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
16.    Лурье Ю.Ю. Аналитическая химияпромышленных сточных вод //Ю.Ю. Лурье — М., Химия, 1984.-С. 302 (цитировано поБродский, Савчук, 1998).
17.Методы биотестирования вод: Сб.Ин-та хим. физ. АН СССР./ Сост. Н.А. Потапова, Т.В. Королевская — Черниговка,1988. -С.17-18. (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
18.Месробяну Л. Физиология бактерий /Л. Месробяну, Э. Пэунеску — Меридиане, 1963. — 807 с. (цитировано по Туманов,Глухова и др., 1998).
19.Немировская И.А., Аникеев В.В.,Теобальд Н., Раве А. // Журн. аналит. Химии, 1997. -Т.2 -№4 -С. 392-396 (цитированопо Бродский, Савчук, 1998).
20.    Нестерова Г.Н. Биология протея / Г.Н.Нестерова — Горький: ГГУ, 1972. — 59 С. (цитировано по Туманов, Глухова и др.,1998).
21.    Основные свойства нормируемых в водахорганических соединений // М.,1985. — С. 92 (цитировано по Бродский, Савчук,1998).
22.Павленко В.В. Метод оценкитоксичности и мутагенности сточных вод и химических соединений / В.В. Павленко,Л.А. Демидова, Л.Я. Трубачева и др. // Методы биотестирования вод: Сб. Ин-тахим. физ. АН СССР. Черноголовка, 1988. — С. 73-77 (цитировано по Туманов,Глухова и др., 1998).
23.                  Петрикевич С.Б.Оценка углевородокисляющей активности микроорганизмов / С.Б. Петрикевич, Е.Н. Кобзев,А.Н. Шкидченко // Прикладная биохимия и микробиология. – 2003. – Т.39, №1. – С.25-30.
24.Положение о Единой государственной системе экологического мониторинга. Утверждено Приказом Минприроды России №49 от 9.02.95 г.
25.Постановление губернатора Иркутской области от 19.12.96 № 442-п «О территориальной системе экологического мониторинга Иркутской области»
26.Постановление Совета МинистровПравительства РФ от 24.11.93 г. № 1229 «О создании единой государственнойсистемы экологического мониторинга»
27.    Постнов И.Е. Биологический методанализа: проблемы избирательности и чувствительности определения биологическиактивных веществ / И.Е. Постнов, А.А. Туманов // Журн. аналит. химии. – 2000. — Т.55, №2. — С. 208-211.
28.    Рекламный листок фирмы Hach
29.    Рубенчик Л.И. Микроорганизмы-биологические индикаторы / Л.И. Рубенчик. — Киев: Наукова думка, 1972. — 161 с.77 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
30.    Руденко Б.А. Методы определениятоксичных загрязняющих веществ в морской воде и донных осадках. // Б.А.Руденко, К.П. Федоров, Б.А. Виноградов и др. М.: Гидрометеоиздат, 1981. — С.87-92 (цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
31.     Руководство поконтролю загрязнения атмосферы. РД 542.04.186-89// М.: Гидрометиздат, 1991, 321с. (цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
32.Руководство по методам химическогоанализа морских вод / Под ред. Орадовского С.Г.- Л.: Гидрометиздат, 1977. С.118
33.Савчук С.А. / Журнал аналит. химии //С.А. Савчук, Б.А. Руденко, Е.С. Бродский и др. // 1995. — Т.50. — № 11- С.1181-1187(цитированопо Бродский, Савчук, 1998).
34.Санитарные правила и нормы. №4630-88(цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
35.СЗ РФ. 1997. №21. Ст. 2483 РубенчикЛ.И. Микроорганизмы- биологические индикаторы / Л.И. Рубенчик. — Киев: Науковадумка, 1972. — 161 с. 77 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
36.Сенцова О.Ю. Успехи микробиологии /О.Ю. Сенцова, В.Н. Максимов. – М: Наука, 1985. – Вып. 20. С. 234-237.
37. Смирнов Б.А. Методы исследованиясостава органических соединений нефти и битумоидов / Б.А. Смирнов. – М: Наука,1985.- С. 198-131
38.Сиволодский Е.П. А.с.№1786340.СССР.// Б.и., 1974. №45. С. 69 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
39.Туманов А.А. Физико-химические методаанализа / А.А. Туманов, М.Н. Глухова, Г.М. Субботина — Сб. ГГУ: Горький,1982.-С. 114-117. (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
40.Туманов А.А. Ответные реакциимикроорганизмов на изменение химического состава среды и трансформация их ваналитический сигнал / А.А. Туманов, М.Н. Глухова, Г.М. Субботина // Журналаналитической химии, 1998.-Т.53.-С. 1252-1260
41.Туманов А.А. Методы биотестированиявод / А.А. Туманов, С.М. Фролова, М.Н. Глухова // Сб. Ин-та хим. физ. АН СССРЧерноголовка, 1988. — С. 73-77(цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
42.Хмельницкий Р.А. Масс-спектроскопиязагрязнений окружающей среды / Р.А. Хмельницкий, Е.С. Бродский // М.: Химия,1990. -С. 182(цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
43.Хромченко Я. Л. Химия и технологияводы/ Я.Л. Хромченко, Б.А. Руденко //1981. — Т.3. — №1. — С.22-55(цитировано поБродский, Савчук, 1998).
44.    Шляхов А.Ф. Газовая хроматография ворганической геохимии./ А.Ф. Шляхов — М.: Недра, 1984. -221 С (цитировано поБродский, Савчук, 1998).
45.    Экологический мониторинг нефтегазовой отрасли. Физико-химические и биологические методы: учеб. пособие. / Саксонов М. Н., Абалаков А. Д., Данько Л. В. и др.- Иркутск: Иркут. ун-т, 2005. – 114 с.
46.    Brown B., Boveri L.// Пат. №2228407 (Франция), РЖХ,1976.Т.6 (цитировано по Туманов,Глухова и др., 1998).
47.    Butt J.A., Duckworth D.F., Perry S. G. // Characterisation of Spilled Oil Sampless, Chichester:Wiley.1986 (цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
48.    Gladilovich D., KindukhovW., Kracheninnikov А., Stгоganov А. // In. congress оп analytical chemistry. Moscow, Russia, June 15-21. 1997. Abstacts. У. 2. N, 21 (цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
49.    Gobet A.B., Wirssen C.,Jun Jones G. E.// Gen. Microbiol. 1970. V.62. P/ 159-167 (цитировано по Туманов,Глухова и др., 1998).
50.    Kavanagh F. // Analyticalmicrobial. N.Y.: Acad. Press, 1963(цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
51.    Kocch O.G., Koch- DedisJ.A.// Handbuch der Spurenanalis. 1964. B.2.№4P. 1115-1163(цитировано по Туманов,Глухова и др., 1998).
52.    Lancas F. M. Cfrrilho E.,Daen G.H.N., Camilo M.C.F.// J. of high resolution chromatography. 1989. У. 12. Р. 368-371(цитировано поБродский, Савчук, 1998).
53.Massoud M.S., Al- AbdaliF., Al- Ghadban A. N., Al- Saravi M. // Environmental pollution. 1996. V. 93.№ 3. Р.285-302 (цитировано по Бродский, Савчук,1998).
54.Massoud M.S., Al- AbdaliF., Al- Ghadban A. N., Al- Saravi M. // Environmental pollution. 1996. V. 93.№ 3. Р.271-284 (цитировано по Бродский, Савчук,1998).
55.Mitruka B.M, Alexander M. // Appl. Microbiol. 1975. V. 16. № 4. P. 636-640
56.Monk P.R. Process Biochem/Monk P.R- 1978, V.13. №12 P. 4-5 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
57.Мullег D., Wellner В.//Dtsch. gewasserk.Mitt. 1975 B.19 S. 120-123 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
58.Nicolas D.Y.D. // Ann.N.Y. Acad. Sci. 1966. V.137.№1.P. 217-231(цитировано по Постнов,Туманов, 2000)
59.Oil in the Sea. Inputs,Fate and Effect. Washington D. C., NAS, 1985. P. 600(цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
60.Paasivirta J., HerzchuhR., Lahtipera M. et al.// Chemosphere.1981. V. 10.№8. Р. 919-928(цитировано по Бродский, Савчук, 1998).
61.Ramsdale S.J., WilkinsonA. //J. Inst. Petr,1968. V. 54. P. 326 (цитированопо Бродский, Савчук, 1998).
62.Rosenberg B., Renshaw E.,Wancamp L.// Bacterol. 1967.№33. Р. 716-732 (цитировано по Туманов, Глухова и др., 1998).
63.Биоремедиация загрязнённых нефтью инефтепродуктам почв без экскавации и перемещении грунта [Электронныйресурс].-1999—. — Режим доступа: file:D:\USER\TK\Internet\нефть-1.НТМ, свободный
64.Университет Гент, Бельгия (LETAE) подруководством проф. G. Persoone [Электронный ресурс]. — Режимдоступа: www.microbiotests.be/